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          EB 病毒轉化成淋巴細胞

          發布時間: 2023-01-11  點擊次數: 366次

          材料與儀器

          全血
          刀豆凝集素A
          RPMI 生長培養基 離心管

          步驟

          1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生長培養基。

          生長培養基(RPMI1640 800 ml,FBS 200 ml,2 mmol/L-谷氨酰胺,5 μg/ml 兩性霉素,50 μg/ml 慶大霉素)

          2. 取 15 ml 無菌離心管,加 3 ml Histo-paque1077(Sigma),在其上加 4 ml 稀釋血,分離淋巴細胞。

          3. 室溫 300 g 離心 30 分鐘,棄上層清亮血漿。

          4. 收集不透明淋巴細胞層,細胞懸液倒入 50 ml 無菌離心管。

          5. 20 ml RPMI 1640 生長培養基洗兩次,室溫 300 g 離心 10 分鐘。

          6. 10 ml 血分離的細胞懸于 1.0 ml 含 EB 病毒的上清。

          7. 細胞懸液(1.0 ml)放入 25 cm2 組織培養瓶,垂直放置,37℃ 5% CO2 孵育 1~3 小時。

          8. 孵育后,加入 3 ml 含 0.2 μg/ml 刀豆凝集素A 的 RPMI 1640 生長培養基,水平放置,使細胞均勻分布于全生長面。

          9. 每周加 1 ml 含刀豆凝集素A 的新鮮 RPMI 1640 生長培養基,不要吸出原培養基。


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