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          小鼠MSC細胞的提取操作

          發布時間: 2023-01-04  點擊次數: 692次

                MMSC細胞一般采用,長骨解剖和骨髓分離程序,總體目標是快速、系統地取出長骨,并收集骨髓細胞進行進一步的實驗分析。這種方法有助于回答有關骨髓生物學、腫瘤轉移和免疫學的關鍵問題。這項技術的主要優點是解剖過程快速、標準化,骨髓分離程序相當無菌,首先處死小鼠并將小鼠置于仰臥位。

                然后將小鼠的四個爪墊固定在踝關節下方,用70%乙醇噴灑小鼠,徹-底沖洗腿部。下一步,在臀部正上方的下腹部中線右側做一個小切口,將切口向下延伸到腿部,穿過踝關節。拉回皮膚。

                然后切開固定在股骨近端的股四頭肌,露出大腿骨的前側,并用銷釘將肌肉從腿部固定出來,與木板成45度角。用剪刀抵住股骨后側,從膝關節上剪下腘繩肌。然后將固定在股骨近端的皮膚和腘繩肌向后拉,露出骨的后側,并將腘繩肌從腿部固定出來,使固定銷成45度角。

           

                用鑷子抓住股骨遠端,剛好在膝關節上方。然后引導股骨干兩側的剪刀刀片朝向髖關節。到達股骨頭后,扭轉剪刀,將頂部刀片直接移到股骨頭上方,使股骨脫臼。

           

               用鑷子抓住股骨干的頂部,從股骨頭上切下軟組織,將股骨從髖臼中取出。然后將整個腿骨,包括股骨、膝蓋和脛骨向上拉離身體,小心地切斷連接腿部與皮膚的結締組織和肌肉。當所有的結締組織都被移除后,拉伸踝關節并扭轉剪刀,使脛骨脫臼。

           

                抓住脛骨遠端,注意不要切斷肌腱,將脛骨向上拉離身體和釘板。然后去除任何殘留在膝蓋長骨上的結締組織,以及任何附加在股骨和脛骨上的肌肉或結締組織。抓住股骨,使髕骨朝外,股骨頭朝下。

           

                過度伸展膝關節,扭動剪刀,使脛骨與股骨脫臼。然后移除所有連接股骨和脛骨的結締組織。下一步,抓住股骨,使前側朝外,股骨頭朝下,然后將剪刀沿股骨干向上引導至髁部。

           

                輕輕地來回旋轉剪刀,去除髁突、髕骨和骨骺,露出干骺端。然后,用鑷子、剪刀和低塵擦拭紙去除任何附加在股骨上的肌肉或結締組織。下一步,抓住脛骨,前側朝外,踝端朝下。

           

                如果脛骨骨骺完好無損,將剪刀沿脛骨軸向上引至髁突處,輕輕來回轉動剪刀,將髁突和骨骺切除,露出脛骨干骺端。然后移除任何附加在脛骨上的肌肉或結締組織,如剛才所示。為了獲取骨髓,首先用一根18號的針穿過一根0.5毫升的微量離心管的底部。

           

               然后把長骨放進管子里,膝蓋朝下,蓋上蓋子。將0.5毫升的微型離心管放入1.5毫升的微型離心管中,并在大于或等于10000倍g的微型離心管中離心15秒。通過目視檢查確認骨髓已經從骨頭中旋出。

           

          •使用10mL注射器,抽出骨髓細胞

           

          •轉移至50mL錐形管中,用FSB將體積增加至50mL

           

          •將50uL樣品轉移到eppendorf試管中,并進行細胞計數

           

          •以1200轉/分的轉速旋轉細胞8分鐘

           

          •從離心細胞中倒出上清液,轉入干細胞完-全培養基中進行培養

            MMSC-bm第一天.png           MMSC-BM.png

                 正常培養第一天                    正常培養第三天

          提取的小鼠的MMSC-bm             

          間充質干細胞完-全培養基進行純化和培養。


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