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          Biozellen®3D細胞培養基質膠在3D細胞球體培養試驗

          發布時間: 2022-02-21  點擊次數: 829次
          3D 細胞球體培養試驗步驟:
          A、試劑制備
          1、A 基質膠:將 A 基質膠溶于 37℃水浴槽回溫 10 分鐘, 確認*融解.
          2、C 緩沖溶液(1X)制備:使用前將 10X C 緩沖溶液用冰的無細胞培養液(例如: 無血清 DMEM、opt-MEM)制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .
          3、D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.
          B、Biozellen®3D 細胞培養基質膠的制備
          全部步驟需要在無菌環境內操作,操作步驟如下:
          1、將 24 孔培養板放置于冰上預冷半小時。
          2、細胞計數后取 2×105~2×107 細胞與 0.5 毫升 37℃ 細胞培養基均勻混合,并與 0.5 毫升 37℃ A 膠按照 1:1 等比例均勻混合,最終細胞密度 1*105~1*107cells/mL。
          注:請選擇適當的培養溶液與條件進行試驗。
          3、取 20-40 微升步驟 2 的混合液滴于 步驟 1 預冷的培養板上,膠體將于 5 分鐘內成膠。 注: 測試膠體是否成膠,可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。
          4、待膠體成膠后,添加 1 毫升冰的 1X C 緩沖溶液,并蓋過步驟 3 的膠溶液,固定 15 分鐘。
          5、待 15 分鐘固定后,小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養基溶液。
          6、將含有細胞的膠于 37°C 二氧化碳培養箱內進行 7~14 天的培養,并觀察細胞球體的形成,按正常培養基更換頻率進行更換操作。
          C、溶膠與收集細胞球體準備程序
          1、小心的將培養基吸取移除,并用 1X PBS 進行清洗。
          2、小心的將 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的 D 緩沖溶液,蓋過膠滴于室溫反應 5 分鐘。
          3、溫和的用 1 毫升移液管吸取,直到膠滴*溶解。
          4、將含有細胞球體的溶液吸入 1.5 毫升離心管,用 1000 rpm 的轉速離心 10 分鐘,移除上清液體并收集細胞球體做分析。
          D、收集單顆細胞準備程序
          在分離單細胞前,先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作
          1、添加 trypsin-EDTA 并與收集的細胞球體于 37°C 混合反應。
          2、用 1 毫升移液管混合,直到細胞體*分解。
          3、待細胞球體*分解,加入 3 倍體積的 1X PBS,并用 1000 轉的轉速進行離心 10 分鐘,并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。

           

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