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          一句話知曉實驗方法怎么選?

          發布時間: 2021-09-08  點擊次數: 798次

          在分子生物學實驗室里的玩法,無非就是用某種特定的刺激物(如細胞活素)去刺激一些細胞或組織,讓它們 high 起來,然后分析細胞對這些外源刺激物的反應,檢測細胞內哪條信號通路被激活或失活,或者什么蛋白被分泌出來。這里面就有很多種方法,哪種最合適,關鍵看你要檢測這個反應的哪個方面的特性。

          WB 

          建立蛋白質的個人檔案 

          一個典型的免疫印跡實驗(Western Blot,WB)可檢測信號通路中某種蛋白質的特性、表達和分布,分析容量大、敏感度高、特異性強。但至于蛋白-蛋白相互作用則要用另一種更復雜的方法,即免疫共沉淀法( Coimmunoprecipitation,Co-IP),它接近細胞內的生理情況,是以成為經典方法。

          SPR 

          想知道 Ta 和 Ta 能有多親密? 

          表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)除了研究蛋白-蛋白相互作用(例如受體-配體相互作用),還有可研究小分子-蛋白或細胞-蛋白的相互作用。這種方法不需要標記蛋白(熒光標記或同位素標記),還可以實時定量分析這些相互作用的親和力、熱力學、動力 學特性。SPR 是分析動力學和親和力的金標準。

          這些分析用酶聯免疫吸附實驗(EenzymeLinked ImmunosorbentAssay,ELISA)也可以做,原理差不多。

          PCR 

          把小樹養大才能更好地招風 

          轉錄因子激活并和靶基因結合之后,該基因就被激活。PCR(Polymerase Chain Reaction)或Real Time PCR 可以把特定的 DNA 序列大幅擴增,便于檢測活性基因的表達情況。

          ELISA 

          追蹤到天涯海角! 

          如果要看看細胞外如何,比如細胞培養上清液或體液中的某種蛋白質分泌情況,則通常選用 ELISA,從而獲知相應基因的活性。


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